線蟲常規(guī)質?；虮磉_載體

概述

第一次使用顯微注射法將DNA遞送至線蟲體內的實驗發(fā)生在1991年。在這個實驗中，常規(guī)質粒DNA被注射到線蟲的遠端性腺。注射后的DNA進入性腺細胞細胞核中形成染色體以外的質粒微陣列，并可以遺傳到下一代。該種技術存在多種局限：首先，常規(guī)質粒形成的微陣列在多個世代后其表達水平可能會不穩(wěn)定。第二，該方式產生的轉基因動物是嵌合體，意味著有一些細胞成功轉染了而另一些則沒有。

關于該載體系統(tǒng)的更多信息，請參照下列文獻。

參考文獻	主題
EMBO J. 10:3959 (1991)	DNA transformation in C. elegans
Sci Rep. 9:9192 (2019)	Promoter-proximal introns increases gene expression levels in C. elegans.

亮點

我們的載體經過專門優(yōu)化，整合了啟動子近端的內含子序列在載體骨架上，可以在線蟲中高水平表達目的基因。

優(yōu)勢

技術簡單：向線蟲轉染質粒載體是技術上相對直接且對比病毒載體需要包裝生產而更為簡單的方式。可以使用電轉染、顯微注射或者喂食包含質粒載體的特定菌株的大腸桿菌等方式將質粒導入線蟲體內。

裝載量大：我們的載體可以容納總共約30 kb的DNA。該質粒的骨架部分只占約2.25 kb，因此留下了巨大的空間用于插入用戶的目的基因。

高表達水平：合成的啟動子近端的內含子序列被整合至載體骨架，可以帶來很高水平的基因表達。

不足之處

載體DNA無法整合基因組：常規(guī)質粒載體主要以游離體DNA的形式存在于細胞中而且通常不整合基因組。如果質粒載體含有抗藥性基因的表達盒，那么載體DNA穩(wěn)定整合細胞基因組可以對轉染的細胞進行藥篩。

可轉染的細胞類型有限：使用常規(guī)質粒轉染不同的細胞類型的轉染效率差異可能很大。

基因遞送效果的不均一性：盡管高水平表達的轉基因容易實現，但是質粒轉染的均一性可能較差。有些細胞攜帶較多的質?？截?，有些則攜帶較少的拷貝甚至沒有。

載體關鍵元件

Promoter: The promoter driving your gene of interest is placed here.

Synthetic intron: This is placed in proximal to promoter to promote gene expression.

Kozak: Kozak consensus sequence. This is placed in front of the start codon of the ORF of interest to facilitate translation initiation in eukaryotes.

ORF: The open reading frame of your gene of interest is placed here.

3' UTR+polyA: Allows transcription termination and polyadenylation of mRNA transcribed by RNA polymerase II. It functions in somatic and germ cells.

Ampicillin: Ampicillin resistance gene. It allows the plasmid to be maintained by ampicillin selection in E. coli.

pUC ori: pUC origin of replication. Plasmids carrying this origin exist in high copy numbers in E. coli.

相關服務

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